Lo más habitual en cualquier laboratorio de genética es extraer el ADN de cualquier tejido o superficie. En mi caso he podido extraer ADN de hojas de plantas, de semillas, de tejido de lagarto, de lodo, de sangre…e incluso de los compuestos obtenidos de un tanque de fermentación.
Hace unos años era necesario preparar para cada ocasión una serie de tampones o buffers para poder extraer el material hereditario. Y cada disolución tenía que prepararla cada uno. Ahora todo es muy sencillo. Existen kits de extracción para cada tipo de tejido o muestra a analizar. La utilización de estos kits tienen sus pros y sus contras: generalmente la eficiencia de la extracción (la cantidad de ADN obtenido por extracción) suele ser bastante mayor con los métodos tradicionales. Sin embargo, la pureza del ADN aislado es mayor cuando se usan los kits. Dependiendo para qué se vaya a utilizar el ADN y el tipo de estudio, será mejor tener más ADN y menos puro ó viceversa. Las nuevas tecnologías suelen “funcionar” mejor cuanto más limpia sea la extracción, ya que en muchas ocasiones recomiendan purificarlo.
Cuando ya se tiene el vial con el ADN disuelto en el tampón de elución, siempre hay que hacer una cuantificación. Con aparatos como el NanoDrop, la cantidad de ADN utilizado para cuantificar es de tan sólo 1 microlitro. Para hacerse una idea, es poco más de lo que ocupa la impresión del punto en el teclado de un ordenador. Hay ocasiones en que existen problemas con las mediciones y se opta por seguir el método tradicional que consiste en hacer un gel de agarosa a una concentración del 0,8% y realizar una electroforesis de todas las extracciones. Posteriormente, la imagen que se obtiene en el transiluminador de rayos ultravioleta (siempre que se utilicen marcajes como el bromuro de etidio o SybrGreen) se utiliza para hacer un cálculo estimado de la concentración de ADN gracias a la extrapolación que nos permite el marcador de fragmentos de ADN (un marcador de ADN en escalera (DNA ladder) no es más que un fragmento de ADN el cuál ha sido cortado de forma que se obtienen bandas de un tamaño conocido), ya que sí que sabremos la concentración cargada en el gel de ese marcador.
Escuchando: canciones en Jamendo.com
o sea que esta corrida en el gel es solo para asegurar de haber extraido el ADN?
Hola Elisa. Como he explicado al final, también se puede extrapolar de forma aproximada la concentración de ADN extraído mediante la comparación con el marcador de pesos moleculares. Si necesitas algo más, aquí me tienes. Un saludo y gracias por el comentario ;D
si deseo extraer los microorganismos de la hojarasca para obtener el adn de estos, puedo realizar un lavado o raspado de la hojarasca y a partir de aqui extraer el adn
Hola Teresa. Puedo asegurarte que sí. Estuve trabajando en estudios de diversidad mediante análisis genéticos de regiones específicas de ADN de microorganismos existentes en muestras de suelos y existen kits de extracción destinados para ello. En el caso de la hojarasca, no sé si habrá algún producto comercial pero debería haber algo que pudieras utilizar para extraer y aislar el ADN de tus muestras. Si puedes, busca un kit antes de utilizar métodos más rudimentarios si quieres obtener rendimiento en cuanto a la pureza del ADN extraído.
Un saludo y suerte en tus estudios.
Hola! Quería saber si en el nanodrop nos da mucha concentración y las relaciones 260/280 y 260/230 súper bien, puede ser que igualmente esté degradado?
Porque no me da una pcr y aunque los valores del nano me dieron bien, ya dudo!
Gracias!
Hola Camila. Antes de nada, deberías hacer un gel de electroforesis en agarosa al 0,8% para comprobar esa degradación. En 1 hora, entre preparaciones y electroforesis, sabrás si el ADN está íntegro o no. Un saludo 😉
Hola Doctor Genoma, oye dónde encuentro información sobre cuántos tipos de ADN hay, cómo se extrae cada uno y de qué tamaño en pares de bases es el ADN con el que uno se queda después de la extracción? cómo sé si está fragmentado? muchas gracias y saludos